■ 不该质体与低:

 △ 大肠杆菌的戒除毒品
涂板培育,气体培育新半殖民地的再选择。

 △ 质体拷贝数低  
鉴于低应用低拷贝数搬运器理由的质体DNA滴下量低,同一功用的可掉换严刑
贝数搬运器。

 △ 缺少细菌质体
稍微不乱菌株中不存在稍微质体。,屡次转变后能够通向质体走慢。。
诸如,在大肠杆菌染色体组有效不不乱,因而不要频繁切换,每回注射疫苗时
霉臭设法对付单细菌菌落。独白,抗菌作用的浓度的过滤器是右边的。

 △ 碱脱离关系恶意的
细胞培育液的过量的应用,电池将通向开裂不可。,可以筹集或增加细菌烫伤P1量、
P3和P2的全部含义。对低拷贝数质体,滴下时,可以应用双P1receiver 收音机、P2和P3,能够
前进滴下质体质体的全部含义和高质量的。

 △ 烫伤应用不妥
烫伤P2、P3在高温时能够涌现多云气象。,应敷在37℃少直到闭幕是清晰的的
烫伤,为了应用。

 △ 吸附柱过载
不一样货物吸附柱的吸附满意的,免得你必要滴下大批的质体,请泄压屡次。若
增菌培育基,诸如,结核 或2×YT,液量不得已增加;免得质体和当主人菌是极端地高的
的拷贝数或生长速度,你必要整齐培育气充其量的的LB。

 △ 极度的质体渐退(格外地大质体)。
当洗提渐退质体,可真正的延伸发烧时期或渐退。

 △ 含酒精的饮料残留
洗完后应放量去除残留液以离心机分离冲洗,树脂子群应在洗涤树脂后烘干。,再加
洗提缓冲溶液。

 △ 洗提液的方位不右边
洗提液应加在硅胶膜中央部位以确保洗提液会完整赘生物硅胶膜的表面的成功最大洗提
性能。

 △ 洗提液不正派的
DNA仅有的在低盐烫伤洗提,如洗提缓冲溶液EB (10 mM Tris·Cl, pH 8.5)
或水。洗提性能不求再进pH值。最大洗提性能中间。确保当水洗提
在刚过去的范围内的pH值,免得pH值太低,能够通向低洗提。洗提杀菌蒸馏水或含酒精的饮料
通行证发烧到60摄氏温度是无益的缓冲烫伤的应用。

 △  洗提充其量的过小
洗提充其量的对恢复有必然压紧。以洗提充其量的前进恢复的筹集,但货物浓度使萧条
低。为了设法对付较高的恢复可以增大洗提充其量的。

 △ 洗提时期过短
对恢复的洗提时期会有必然的压紧。洗提敷一分钟可以成功上进的成功实现的事。
■ 质体纤细不高:
△ 混合加里
不要应用过度的细菌。烫伤P1、P2、P3和离心处置后的烫伤应明白,免得它是混合
小加里悬浮,再经过离心去除,再停止下一步。

 △ 混合RNA
RNase 博士不彻底,请增加增味剂或在室温下同意烫伤中P3。如
烫伤P1早已挽回了超越6个月,请加核糖核质酵素烫伤P1 A。

 △ 混合染色体组DNA
同意烫伤P2和P3后,应主持混合。,免得猛烈振荡,可以从染色体组DNA中分割零件
在混合质体。免得在P2太厚后添加烫伤,不驯服的的混合,请增加扁平体
量。细菌培育时期长,通向细胞使变质和D,不超越16 小时。

 △ 很长一段时期P3烫伤
同意P3烫伤后,时期是否太长了,或许他们能够发生小零件DNA腐蚀。

 △ 有大批的核质酵素的当主人菌
有大批核质酵素的当主人菌,在质体DNA质体的潦倒列队行进,质体DNA的滴下成功实现的事的压紧。
整性,当主人大肠杆菌的最好选择不含核素EN,如DH5α和TOP10。

 △ 开裂时期太长
P2是开裂后同意烫伤中不应超越5分钟。

 △ 二聚物和多聚肉体美式的质体
在质体容许复制的列队行进中结构,与领导者相互关系的细菌,负电泳可检测。

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